ELISA(酶联免疫吸附测定,Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)试剂盒是一种基于抗原-抗体反应的生物检测工具,用于检测样本中的特定蛋白质、抗原、抗体、激素、细胞因子等。ELISA 试剂盒广泛应用于生物医学、食品安全、环境检测等领域,具有高灵敏度、特异性强、操作简便的特点。
ELISA 试剂盒的基本原理是抗原-抗体特异性结合,并通过酶催化显色反应进行定量或定性检测。主要检测步骤如下:
包被抗体:将捕获抗体固定在微孔板上。
加入样本:待测样品中的目标物(抗原或抗体)与固定的抗体结合。
酶标抗体反应:加入酶标二抗,与目标物结合,形成抗原-抗体-酶复合物。
显色反应:加入底物(如 TMB),酶催化显色,颜色深度与目标物浓度成正比。
比色检测:使用酶标仪在特定波长下测定吸光度,计算目标物浓度。
1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞 迅速小心地分离。
2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。