ELISA试剂盒的组成
ELISA试剂盒通常包含了所有进行ELISA实验所需的试剂和配套材料。其主要组成部分包括:
- 微孔板:ELISA试剂盒通常配备有预涂有抗原或抗体的96孔微孔板。微孔板是试剂盒的核心部分,用于容纳和固定抗原或抗体。
- 标准品:标准品用于绘制标准曲线,帮助定量样本中的抗原或抗体。标准品通常包含已知浓度的目标物质。
- 缓冲液:ELISA试剂盒会包含用于稀释样本和标准品的缓冲液,以保持实验过程中的pH值稳定,确保实验的准确性。
- 酶标记抗体/抗原:用于检测的抗体或抗原会与酶(如辣根过氧化物酶HRP、碱性磷酸酶AP)连接。酶通过催化底物反应生成可视信号(如颜色变化),信号强度与目标物质的浓度成正比。
- 底物溶液:底物溶液是与酶反应后生成可测量信号的化学物质。不同的酶会有不同的底物。例如,HRP通常使用过氧化氢和某些有色底物产生可见光信号。
- 终止液:用于停止酶反应,通常含有酸性物质,能够立即停止底物的反应,确保测量时信号稳定。
1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞 迅速小心地分离。
2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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