ELISA 试剂盒的工作原理
ELISA 试剂盒基于抗原-抗体结合和酶催化反应,通过显色检测目标物的存在和浓度。一般步骤如下:
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样品加样:将待测样品加入微孔板,目标物与固定的抗体(或抗原)结合。
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孵育与洗涤:孵育一段时间后,洗去未结合物质。
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加入检测抗体:与目标物特异性结合,提高检测信号。
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酶标记结合:加入酶结合物,与抗体复合物形成检测体系。
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显色反应:加入底物后,酶催化显色,颜色深度与目标物含量相关。
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终止反应并测量:加入终止液后,通过酶标仪测量光吸收值。
ELISA 试剂盒的存储和使用注意事项
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存储条件:大多数 ELISA 试剂盒需存放在 2-8°C 冷藏环境,部分组分(如酶和标准品)可能需要 -20°C 冷冻。
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避免交叉污染:使用不同的移液枪头,严格按照说明操作,防止污染影响实验结果。
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定期校准仪器:使用酶标仪读取 OD 值前,应确保仪器状态良好。
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严格按照说明书操作:不同品牌和种类的 ELISA 试剂盒可能有不同的操作流程,需详细阅读说明书。
此产品,为我司的优势产品,无论是国内现货还是进口产品,因为销售量巨大外加上是一级代理商,品质和价格都具有相当的竞争力。" PCR原理和步骤 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应) 是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法 它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度 (50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对; (3) 延伸(Extension):在Taq DNA聚合酶合成DNA 的最适温度下,以目的DNA为模板进行合成. 由这三个基本步骤组成一轮循环, 理论上每一轮循环将使目的DNA 扩增一倍 (4)这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板. 所以经25-35轮循环就可使DNA扩增达106 倍。 一、PCR反应中的主要成份 1. 引物:PCR反应产物的特由一对上下游引物所决定。 引物的好坏往往是PCR成败的关键。 引物设计和选择目的DNA 序列区域时可遵循下列原则: (1) 引物长度约为16-30bp, 太短会降低退火温度影响引物与模板配对, 从而使非特。太长则比较浪费,且难以合成。 (2) 引物中G+C含量通常为40%-60%,可按下式粗略估计引物的解链温度 Tm=4(G+C)+2(A+T).(3) 四种碱基应随机分布,在3'端不存在连续3个 G或C,因这样易导致错误引发。 (4) 引物3'端与目的序列阅读框架中子或 位核苷酸对应, 以减少由于子摆动产生的不配对。 (5) 在引物内, 尤其在3'端应不存在二级结构。 (6) 两引物之间尤其在3'端不能互补, 以防出现引物二聚体. 减少产量。两引物间不存在4个连续碱基的同源性或互补性。 (7) 引物5'端对扩增特影响不大, 可在引物设计时加上限制酶位点、 核糖体结合位点、起始子、缺失或插入突变位点以及标记生物素、 荧光素、等. 通常应在5'端限制酶位点外再加1-2个保护碱基。 (8) 引物不与模板结合位点以外的序列互补。所扩增产物本身无稳定的 二级结构, 以免产生非特扩增,影响产量。 (9) 简并引物应选用简并程度低的子, 例如选用只有一种子的 Met, 3'端应不存在简并性。否则可能由于产量低而看不见扩增产物。 |
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