ELISA的基本原理是利用抗原-抗体特异性结合的特点,通过酶的催化作用产生可测量的信号。具体步骤如下:
抗原/抗体吸附:首先,将待检测的抗原或抗体固定在固相载体(通常为96孔板)的表面。
样品加入:加入样品(如血清、尿液、细胞培养液等),目标分子(抗体或抗原)与已固定的抗原或抗体发生特异性结合。
孵育与洗涤:孵育一定时间后,用洗涤液去除未结合的物质,确保只剩下与目标分子结合的复合物。
酶标记物加入:加入酶标记的二抗(抗体或抗原),该酶标记物能与目标分子结合。
底物反应:加入酶的底物,酶催化底物发生反应,产生颜色变化或荧光信号。
信号检测:使用酶标仪(ELISA reader)检测信号的强度,信号的强度与样品中目标分子的浓度成正比,从而计算出目标分子的浓度。