ELISA(酶联免疫吸附测定,Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)试剂盒是一种常用于生物和临床诊断的实验工具。它通过酶标记的抗体或抗原,特异性地结合目标分子,进而利用酶的催化反应检测目标物质的存在和浓度。ELISA试剂盒因其高灵敏度、特异性强、操作简便等优点,广泛应用于免疫学研究、疾病检测、疫苗开发等领域。
1. ELISA试剂盒的基本原理
ELISA的原理是利用抗原与抗体之间的特异性结合反应。试剂盒中包含的酶标记抗体或抗原可以与样本中的目标分子(如特定的抗体或抗原)发生反应。当目标分子与酶标记物结合时,酶催化底物反应生成可检测的颜色变化或荧光信号,通过对比标准曲线或直接测量吸光度来定量分析目标物质的浓度。
2. ELISA的类型
根据不同的检测方式和检测物质的不同,ELISA试剂盒可以分为几种类型,主要包括:
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间接ELISA(Indirect ELISA):用于检测样本中是否存在特定的抗体。抗原固定在固相载体上,通过与样本中抗体的结合,进一步与酶标记的二抗反应,产生可测量的信号。
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直接ELISA(Direct ELISA):抗体直接标记酶,通过与目标抗原的结合,产生可检测的信号,适用于检测抗原。
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夹心ELISA(Sandwich ELISA):用于检测抗原,试剂盒中包括固定在固相载体上的捕获抗体、目标抗原、以及酶标记的检测抗体。该方法具有高灵敏度,常用于检测低浓度的目标分子。
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竞争ELISA(Competitive ELISA):样本中的目标抗原与酶标记抗原竞争与固定在载体上的抗体结合,信号强度与样本中目标抗原的浓度成反比。
此产品,为我司的优势产品,无论是国内现货还是进口产品,因为销售量巨大外加上是一级代理商,品质和价格都具有相当的竞争力。" PCR原理和步骤 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应) 是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法 它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度 (50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对; (3) 延伸(Extension):在Taq DNA聚合酶合成DNA 的最适温度下,以目的DNA为模板进行合成. 由这三个基本步骤组成一轮循环, 理论上每一轮循环将使目的DNA 扩增一倍 (4)这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板. 所以经25-35轮循环就可使DNA扩增达106 倍。 一、PCR反应中的主要成份 1. 引物:PCR反应产物的特由一对上下游引物所决定。 引物的好坏往往是PCR成败的关键。 引物设计和选择目的DNA 序列区域时可遵循下列原则: (1) 引物长度约为16-30bp, 太短会降低退火温度影响引物与模板配对, 从而使非特。太长则比较浪费,且难以合成。 (2) 引物中G+C含量通常为40%-60%,可按下式粗略估计引物的解链温度 Tm=4(G+C)+2(A+T).(3) 四种碱基应随机分布,在3'端不存在连续3个 G或C,因这样易导致错误引发。 (4) 引物3'端与目的序列阅读框架中子或 位核苷酸对应, 以减少由于子摆动产生的不配对。 (5) 在引物内, 尤其在3'端应不存在二级结构。 (6) 两引物之间尤其在3'端不能互补, 以防出现引物二聚体. 减少产量。两引物间不存在4个连续碱基的同源性或互补性。 (7) 引物5'端对扩增特影响不大, 可在引物设计时加上限制酶位点、 核糖体结合位点、起始子、缺失或插入突变位点以及标记生物素、 荧光素、等. 通常应在5'端限制酶位点外再加1-2个保护碱基。 (8) 引物不与模板结合位点以外的序列互补。所扩增产物本身无稳定的 二级结构, 以免产生非特扩增,影响产量。 (9) 简并引物应选用简并程度低的子, 例如选用只有一种子的 Met, 3'端应不存在简并性。否则可能由于产量低而看不见扩增产物。 |
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